子宫内膜异位症模型

  子宫内膜异位症( endometriosis,EM)是子宫内 膜腺体和间质种植于子宫以外的一种慢性、雌激素 依赖性疾病, 在育龄期女性中发病率为 10% ~ 15%  。 EM 虽是一种良性疾病,却具有发病范围 广、症状多样、易转移、易复发的恶性行为,至今其 病因及发病机制仍不清楚。 目前 EM 的治疗手段主 要包括手术和激素类药物,但疗效均不理想。 因 此,子宫内膜异位症是妇科学研究的热点和难点 之一。然而,目前 EM 盆腔纤维化的形 成机制尚不清楚。 构建一种高效的子宫内膜异位症动物模型将 有助于对本病发病机制的认识和新药的开发, 同时 可以为探索子宫内膜异位症纤维化发病机制提供 理想模型。

 
1 实验动物
 SPF 级 6 周龄性成熟C57雌小鼠,体 重 18 ~ 20 g, 温度 22 ~ 25℃ ,湿度 55% ~ 60%,12 h光照和12 h 黑暗交替,实验前适应性饲养 1 周。

2 动物造模准备
小鼠动情周期检测：小鼠适应性饲养一周后，取出每笼中小鼠，左手背位固定小鼠，观察外阴情况；用20 μl移液器吸取无菌生理盐水，轻轻插入小鼠阴道内，反复冲洗；获得小鼠阴道脱落细胞悬液，涂片于载玻片上，进行苏木精-伊红（HE）染色观察。
动情周期判断：动情前期(proestrus)：涂片可见有核的大圆形细胞，主要为上皮细胞。持续12-14小时；动情期(estrus)，上皮细胞成熟，脱落，角质化，大量堆叠，呈“落叶堆积”状，无核多边形细胞多见，间杂少量上皮细胞；动情后期(metestrus)：上皮层变薄，白细胞浸润，此期可见大量出现的白细胞，持续5-7小时；动情间期(diestrus)：白细胞逐渐减少，此期可见白细胞、圆形上皮细胞及无核多边形上皮细胞都可见。

3 子宫内膜异位症造模
取出处于动情间期的供体小鼠，使用戊巴比妥钠（30 mg/kg）腹腔注射进行麻醉，待小鼠完全麻醉后，使用剃毛刀将腹部剃毛，使用碘伏涂抹皮肤消毒，腹中线开口，暴露子宫角；将子宫角切下，纵向打开并对切下来的活组织切片剪成四块（2×2 mm）；将处于动情期受体小鼠戊巴比妥钠腹腔麻醉（30 mg/kg），待小鼠麻醉后，将小鼠仰卧位固定，沿中线切口1 cm以暴露腹腔；子宫内膜异位症小鼠使用供体的四个子宫碎片缝合到处于发情期小鼠的腹膜壁上；假手术小鼠：缝合大小相似的腹部脂肪碎片；使用8-0黑色丝线缝合移植的组织，腹肌和皮肤使用4-0缝合线缝合。庆大霉素2万U/只，皮下注射，连续3天。待小鼠苏醒后正常饲养。

4  造模成功确认及分组
小鼠异位灶体积测量：小鼠建模4周后二次开腹，使用游标卡尺测量并计算异位灶体积，记为异位灶体积1 (Volume-1)，计算公式为：异位灶体积=π/6×长度×宽度×高度，确定造模成功。1. 1. 2 试剂与仪器
苯甲酸 β-雌二醇( Sigma,E2758),实验用芝麻油(Acros organics,241002500)
两套眼科常规手术器械(剪刀、镊子、止血钳)、 注射用生理盐水、1 mL 注射器、20 mL 注射器等。