细胞运动能力检测

 

细胞运动能力
细胞运动具有粘附性和趋向性。当细胞受到外界刺激时，细胞内的粘附趋化因子激活，根据刺激性质做出不同的反应，细胞在骨架蛋白的作用下细胞伸出伪足，会在支撑物上反复的粘附和脱离，向刺激点或者远离刺激点运动。不同的刺激条件下会有不同的反应，根据细胞对不同刺激的反应，一般使用细胞划痕实验、细胞迁移能力实验、细胞侵袭能力实验检测细胞的运动能力。
 
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。
实验流程：
1.1、在六孔板中待细胞长满后，使用移液器枪头或其他硬物在六孔板中划1-3条平行的直线，加入PBS轻轻摇晃，去除PBS，重复使用PBS洗5次，以去除划出的细胞；
1.2、细胞分别培养0h、12h、24h后，观察细胞往中线迁移情况，同时使用ImageJ软件对划痕的距离进行检测，以判断细胞迁移能力。
悬浮细胞不适宜做细胞划痕实验。
细胞迁移和侵袭

实验是体外模拟肿瘤细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜小室放入培养板中，将肿瘤细胞接种于小室中，利用培养液成分的差异诱导细胞运动，检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
实验流程：
1 细胞迁移：
1.1、细胞经不同刺激后，去除基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中，1000rpm常温离心5min；
1.2、使用无血清培养基将细胞重悬，使用血球计数板对细胞计数，接种5×10⁴个细胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培养基，轻轻混匀后放入培养箱中培养8h；
1.3、去除上室和下室中的培养基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min；
1.4、加入PBS洗2次，加入结晶紫染色液，常温染色20min，使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞，加入水或者PBS洗两次，去除残留的染色液；
1.5、将transwell小室放在显微镜下拍照。
2 细胞侵袭：
2.1、将matrigel放入4℃冰箱融化过夜，加入预冷的PBS，1:3比例将matrigel稀释，使用预冷的移液器将matrigel加入transwell小室上室中，轻轻加入防止出现气泡，加好后，将transwell小室放入细胞培养箱中凝固30min；
2.2、细胞经不同刺激后，去除细胞培养基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中，1000rpm常温离心5min；
2.3、使用无血清培养基将细胞重悬，使用血球计数板对细胞计数，接种1×10⁵个细胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培养基，轻轻混匀后放入培养箱中培养24h；
2.4、去除上室和下室中的培养基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min；
2.5、加入PBS洗2次，加入结晶紫染色液，常温染色20min，使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞和残留的matrigel，加入水或者PBS洗两次，去除残留的染色液；
2.6、将transwell小室放在显微镜下拍照。

结果示例：

图 A 细胞划痕实验图；B，C 细胞迁移和侵袭实